Главная » Каталог документов » ГОСТ 25583-83

ГОСТ 25583-83
"Птица сельскохозяйственная. Методы лабораторной диагностики инфекционного бронхита"

- 128,00 руб.;
- Официальное издание;
- Доставка или cамовывоз.
- от 95,00 руб./день;
- Мгновенное подключение;
- Различные формы оплаты.
- от 8 790,00 руб.;
- Тысячи (!) документов на DVD;
- Ежеквартальное обновление.

Статус документа: действующий

Дата вступления в действие: 1983-07-01


Документ относится к следующим разделам классификатора:

Нормативно-технические документы. Национальные стандарты
Сельское хозяйство
Земледелие и лесоводство *Почвоведение, анализ почв см. 13.080 *Лесозаготовки см. 79.020
Животноводство и селекция животных *Включая санитарный надзор *Ветеринария см. 11.220


Содержание для ознакомления



ВНИМАНИЕ!!
ФРАГМЕНТ ТЕКСТА ДОКУМЕНТА ПРЕДСТАВЛЕН ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ДЛЯ ОЗНАКОМЛЕНИЯ И СОДЕРЖИТ ОШИБКИ
ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА СООТВЕТСТВУЕТ ОФИЦИАЛЬНОМУ ИЗДАНИЮ

УДК 636 : 576.8.07 : 006.354 Группа С79

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

ПТИЦА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ ГОСТ

Методы лабораторной диагностики

инфекционного бронхита 25583 —83

Agricultural poultry. Methods of laboratory diagnostics

of infectious bronchitis (СТ СЭВ 1744—79)

ПОСТАНОВЛЕНИЕм Государственного комитета СССР по стандартам от 6 января 1983 г. № 18 срок действия установлен

с 01.07.83 до 01.07.83

Несоблюдение стандарта преследуется по ЗАКОНу

Настоящий стандарт распространяется на кур и устанавливает методы лабораторной диагностики инфекционного бронхита.

Стандарт применяют при диагностировании заболевания птицы в лабораториях ветеринарных научно-исследовательских учреждений.

Стандарт полностью соответствует СТ СЭВ 1744—79.

1. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для вирусологического исследования берут пробы тканей и органов — трахеи, слизистой оболочки носовой полости, почек и легких убитой или только что павшей птицы, а от взрослой птицы — почек и яйцеводов.

1.2. Для серологического исследования берут не менее чем от 10 голов птицы дважды с интервалом 14—21 сут пробы крови по 5 см3 от каждой птицы. Отстаивают сыворотку крови.

1.3. Пробы органов и тканей или их 10%-ную суспензию хранят при температуре минус 20°С. Пробы сыворотки крови хранят без добавления консервантов при температуре минус 20°С.

2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Вирусологический метод

Сущность метода заключается в изолировании и идентификации возбудителя заболевания на куриных эмбрионах или на культуре клеток.

Издание официальное ~^ Перепечатка воспрещена

16
ГОСТ 25583—83 Стр. 2

2.1.1. Аппаратура и материалы

Для проведения исследования применяют: ТЕРМостат с температурой нагрева 37—38°С; инкубатор;

ступки фарфоровые;

центрифугу с частотой вращения 3000 об/мин; пробирки стеклянные вместимостью 10, 15 и 20 см3 по ГОСТ 10515—75; овоскоп;

шприцы с иглами;

куриные эмбрионы 9-суточного возраста;

культуру клеток почек куриных эмбрионов или фибробласты; раствор Хенкса; стрептомицин, пенициллин.

2.1.2. Подготовка к исследованию

Пробы органов и тканей растирают в стерильной ступке в изотоническом буферном растворе в соотношении 1 :10 и экстрагируют в течение 2 ч при 4°С. Суспензию центрифугируют с частотой вращения от 1500 до 2000 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость обрабатывают 2000 ЕД/см3 пенициллина и 2 ЕД/см1 стрептомицина.

2.1.3. Проведение исследования

Обработанную антибиотиками надосадочную жидкость иноку-лируют в дозе 0,2 см3 через воздушную камеру в аллантоисную полость шести куриным эмбрионам 9-суточного возраста.

Зараженные эмбрионы инкубируют при 37,5°С и относительной влажности 60—70% и два раза в день овоскопнруют. Эмбрионы, погибшие в течение 24 ч после заражения, не учитывают. Оставшихся в течение 72 ч трех живых эмбрионов убивают охлаждением при температуре 4°С, а остальных собирают и охлаждают через 7 сут после заражения. От первых трех эмбрионов собирают аллантоисную жидкость и хориоаллантоисную оболочку для следующего пассажа, а остальные эмбрионы исследуют на наличие макроскопических изменений.

Проводят четыре последовательных пассажа вируса на куриных эмбрионах, так как первый пассаж в большинстве случаев не вызывает гибели или изменения эмбрионов.

Идентификацию вируса проводят на 9-суточных куриных эмбрионах в реакции нейтрализации (РН), используя известные специфические антисыворотки как минимум к двум основным серо-типам вируса (Massachusets, Connecticut) с индексом нейтрализации антисывороток более 3 lg (см. п. 2.2.3.1), нлн в реакции нейтрализации в культуре клеток почек куриных эмбрионов или фибр«бластов (см. п. 2.2.3.2).

17
Сгр. 3 ГОСТ 25583—83

2.1.4. Обработка результатов

2.1.4.1. Вирус считают идентифицированным и результат положительным, если эмбрионы, инокулированные смесью испытываемого вируса со специфической антисывороткой, остаются живыми и развиваются НОРМАльно, а эмбрионы, инокулированные только испытываемым вирусом, погибают или отстают в развитии; у эм-* брионов наблюдается перекручивание тела, сворачивание тела в шар, уменьшается количество амниотической жидкости, оболочки плотно прилегают к эмбриону.

В культуре клеток при положительной реакции специфическая антисыворотка ингибирует цитопатический эффект, вызванный вирусом инфекционного бронхита.

2.1.4.2. При получении отрицательного результата в реакции нейтрализации (это может быть связано с неспецифичностью используемой антисыворотки к присутствующему серотипу вируса— Massachusets, Connecticut) проводят реакцию преципитации в агаровом геле (РПАГ) по п. 2.2.3.3.

2.2. Серологический метод

Сущность метода заключается в выявлении у переболевшей птицы специфических антител в реакции нейтрализации (РН) и реакции преципитации в агаровом геле (РПАГ).

2.2.1. Аппаратура, материалы и реАКТивы

Для проведения исследования применяют:

баню водяную;

ТЕРМостат с температурой нагрева 37—38°С; центрифугу с частотой вращения 3000 об/мин; пробирки вместимостью 10, 15 и 20 см3 по ГОСТ 25336—82; пипетки градуированные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см3 по ГОСТ 20292-74;

чашки Петри по ГОСТ 25336—82;

штамп для изготовления лунок в агаре;

воронку по ГОСТ 25336—82;

пенициллин;

стрептомицин;

агар очищенный;

мединал;

куриные эмбрионы 9-суточного возраста;

культуры клеток почек куриных эмбрионов, выращенные на среде с 10%-ной телячьей сывороткой;

среды питательные для культуры клеток;

антисыворотки типоспецифические к инфекционному бронхиту, положительные;

штаммы эталонные вирусов инфекционного бронхита разных антигенных типов;

натрий хлористый по ГОСТ 4233—77, 0,87%-ный раств*^; воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72.

18
гост 2S583—83 Стр. 4

2.2.2. Подготовка к исследованию

Пробы сыворотки крови инАКТивнруют прогреванием при температуре 56°С в течение 30 мин. Загрязненную сыворотку фильтруют через бАКТериальные фильтры или обрабатывают антибиотиками.

2.2.3. Проведение исследования в реакции нейтрализации на куриных эмбрионах

2.2.3.1. В реакции используют вирус с титром не ниже 107 • ЭИД 50/1 см3. Готовят серийные десятикратные разведения вируса от 10~3 до Ю-8. Равные количества разведенного вируса, специфических антисывороток и испытываемых сывороток крови смешивают и смесь оставляют на 1 ч при комнатной температуре.

Каждым разведением инокулируют по четыре куриных эмбриона 9-суточного возраста в аллантоисную полость в дозе 0,2 см3. Инокулированные куриные эмбрионы овоскопнруют ежедневно в течение 3—8 сут (в зависимости от используемого штамма); погибшие эмбрионы в течение первых 24 ч не учитывают.

2.2.3.2. Обработка результатов

По истечении 3—8 сут определяют инфекционный статус каждой группы инокулированных куриных эмбрионов и вычисляют ИДм- Разница между логарифмами титра контрольного ряда вируса и титра смеси вируса с испытываемой сывороткой выражает индекс нейтрализации.

При значениях индекса нейтрализации от 0,0 до 1,0 результат реакции считают отрицательным, от 1,1 до 2,0 — сомнительным, от 2,1 и выше — положительным.

Если для 20 и более процентов испытываемых сывороток крови получится сомнительный результат, исследование проводят в реакции преципитации в агаровом геле. При получении сомнительных результатов проводят исследование сывороток крови, полученных при повторном взятии крови от птицы на 14—21 сут. Вируснейтрализующие антитела образуются через 2—3 недели после вспышки заболевания и сохраняются пожизненно, а преци-питирующие антитела — от 2 до 7 недель после начала заражения.

2.2.4. Проведение исследования в реакции нейтрализации на культурах клеток

2.2.4.1. Берут свежеполученную культуру клеток при образовании сплошного монослоя и адаптированный к культурам клеток вирус с титром 5—5,5 ед/см3.

Готовят серийные 10-кратные разведения вируса до Ю-6. Каждое разведение вируса смешивают с равным количеством типоспе-цнфической сыворотки. Если в реакции используются кроличьи

-=ОКОНЧАНИЕ ФРАГМЕНТА ДОКУМЕНТА=-

Документ ГОСТ 25583-83 можно получить тремя способами:

Приобрести полный комплект актуальных документов в виде электронного справочника на DVD. Мы предлагаем специализированные справочники для разных отраслей хозяйственной деятельности.

Так же, можно скачать ГОСТ 25583-83 или любой другой документ очень быстро и за смешные деньги, с оплатой любым способом (электронными деньгами, безналичным расчетом, отправкой SMS).

Если требуется официальное издание, то можно купить ГОСТ 25583-83 - печатную форму документа для технических библиотек и лицензирования деятельности предприятия.