Главная » Каталог документов » ГОСТ 28573-90

ГОСТ 28573-90
"Свиньи. Методы лабораторной диагностики африканской чумы"

- 203,00 руб.;
- Официальное издание;
- Доставка или cамовывоз.
- от 95,00 руб./день;
- Мгновенное подключение;
- Различные формы оплаты.
- от 8 790,00 руб.;
- Тысячи (!) документов на DVD;
- Ежеквартальное обновление.

Статус документа: действующий

Дата вступления в действие: 1991-01-01


Документ относится к следующим разделам классификатора:

Нормативно-технические документы. Национальные стандарты
Сельское хозяйство
Земледелие и лесоводство *Почвоведение, анализ почв см. 13.080 *Лесозаготовки см. 79.020
Животноводство и селекция животных *Включая санитарный надзор *Ветеринария см. 11.220


Содержание для ознакомления



ВНИМАНИЕ!!
ФРАГМЕНТ ТЕКСТА ДОКУМЕНТА ПРЕДСТАВЛЕН ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ДЛЯ ОЗНАКОМЛЕНИЯ И СОДЕРЖИТ ОШИБКИ
ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА СООТВЕТСТВУЕТ ОФИЦИАЛЬНОМУ ИЗДАНИЮ

ГОСТ 28573-90

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СВИНЬИ

МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ

II i iliиш.- официальное
УДК 636.4.001.4:006.354 Группа С79

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

СВИНЬИ

Методы лабораторной диагностики африканской чумы

I \ )к 1

Pip. Methods of laboratory diagnostics 28573—90

of african plague

MKC 65.020.30 ОКСТУ 9809

Дата введения 01.01.91.

Настоящий стандарт распространяется на свиней и устанавливает методы лабораторной диагностики африканской чумы.

Стандарт предназначен для диагностирования заболевания свиней в ветеринарных лабораториях и ветеринарных научно-исследовательских учреждениях.

I. МЕТОДЫ ОТБОРА ПРОБ

1.1. Для проведения исследований от вынужденно убитых больных и павших свиней берут пробы органов и тканей — лимфатических узлов (подчелюстной, протальный и мезентериальный), селезенки, легкого, крови и костного мозга.

Пробы берут не позднее чем через 10 ч после убоя или гибели животных.

1.2. Пробы органов и крови хранят и транспортируют в ТЕРМосе при 4 "С—8 "С не более 24 ч после отбора. При более длительном хранении пробы замораживают.

2. МЕТОД ПРЯМОЙ ИММУНОФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

Сущность метода заключается в соединении специфических иммуноглобулинов африканской чумы свиней (АЧС). меченных флуоресцеиннзотиоцианатом (ФИТЦ). со специфическим антигеном вируса АЧС в зараженных клетках и обнаружении комплекса «антиген-антитело* люминесцентной микроскопией.

2.1. Аппаратура, материалы и реАКТивы

Микроскоп люминесцентный.

Крностаг.

Термостат.

Автоклав.

Холодильник бытовой.

Центрифуга лабораторная любого типа, обеспечивающая частоту вращения 5000 мин'.

Шприцы по МРТУ 46-23.

Банка цилиндрическая по ГОСТ 25336.

Стекла покровные по ГОСТ 6672.

Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Пипетка пастеровская.

Калий фосфорнокислый однозамешенный по ГОСТ 4198. Натрий фосфорнокислый двузамешенныи по ГОСТ 1 1773. Натрий хлористый по ГОСТ 4233.

Издание официальное Перепечатка воспрещена

© Издательство стандартов, 1990 © Стаплартинформ, 2005
С. 2 ПХТ 2857.1 40

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.

Листом по ГОСТ 2603.

Эфир jTiLioHilt по ГОСТ 22300.

Парафин по ГОСТ 23683.

Глиисрнн для чнкроскопнн по ГОСТ 6824.

Гепарин.

Раствор фосфатный буферный рН 7.2—7.4. ФИТЦ-имчуткмлобулины АЧС.

ФИТЦ-нмыуноглобулины классической чумы свиней (КЧС). Вила дистиллированная.

2.2. Подготовка к аналнту

2.2.1. Приготовление фосфатного буферного раствора рН 7,2—7,4

Раствор А. В I дм' дистиллированной воды растворяют 1.78 г дну смешенного фосфорнокислого натрии.

Раствор Б. В I дм'дистиллированной волы растворяют 1,36 i одно «мешенного фосфорнокислого калия.

К 850 см' раствора А добавляют 250 смл раствора Б. В 1 дм' полученной смеси растворяют 8,5 г хлористого ширин. Полученный раствор стерилизуют в аитоклпне н течение 2.5 ч при 2 атм.

2.2.2. Приготовление буферного раствора глицерина

9 см1 глицерина смешивают с I см' фосфатного буферного риствора.

2.2.3. Приготовление нчт-препаратов (срезов, мазков-огисча1ков)

2.2.3.1. От лимфатических узлов (подчелюстного, портального и метенгерилльного). селезенки и легких лвух-трех свиней при помощи криостага берут пробы массой 5—Юг. Из проб готовят срезы толщиной 5 мк и помешают их на покровные стекла, предварительно обезжиренные смесью спирт-эфира в соотношении 1:1. И з каждого органа готовят четыре тест-препарата.

2.2.3.2. И) лейкоцитов крови больных и ннтАКТных свиней готовит мазки-отпечатки. Для этого из краниальной полой вены берут 10—15 см5 крови в пробирку, содержащую гепарин 10—20 ЕД/см1. Кровь в пробирке осторожно перемешивают и выдерживают 30 мин при температуре 37 *С. Пастеровской пипеткой отбирают плазму с лейкоцитами, переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин с частотой вращения KMX) мин '. II . .. ...

жидкость удаляют, а лейкоциты осадка наносят на покровные стекла и готовят по четыре маиса-отпечатка на одну пробу крови.

2.2.3.3. Тест-препараты высушивают при комнатной температуре в течение 15-20 мин. помещают в сосуд с анегоном. выдерживают 10—15 мин при температуре минус 10 "С и подсушивают на воздухе при комнатной температуре до полного испарения ацетона.

2.3. Проведение анализа

Подготовленные icci препараты обрабатывают ФИТЦ-иммуноглобулинамн АЧС н КЧС. Для этого на предметные стекла, помещенные во влажную кнмеру, наносят капли ФИТЦ-нмму-ноглобулннон и ни них помешают тест-препараты срезом или мизком-отнечитком вниз. Камеру помешают в ТЕРМостит и выдерживают 30 мни при температуре 37 'С. Затем тест-препараты промывают в фосфатном буферном растворе в течение 10 мин дважды со сменой раствора, ополаскивают в дистиллированной воде, подсушивают при комнатой температуре н помешают на капли раствора глицерина, нанесенные на предметные стекла. Края предметных стекол окантовывают расплавленным парафином. Тест-препараты просматривают под люминесцентным микроскопом.

2.4. Опенка результатов

В клетках тест-препаратов органов н крови свиней, зараженных вирусом АЧС и обработанных ФИТЦ-иммуноглобулином АЧС. специфический антиген обнаруживают по свечению «гленого нош желто- зеленого цвета в форме отдельных гранул (включений) в перинуклсариоЛ юне на фоне диффузного свечения кленого или желто-зеленого цвета цитоплазмы клеток лимфондного ряда иди макрофагов.

В клетках тест-препаратов органов и крови свиней, не сраженных вирусом АЧС. обнаруживают тусклое свечение клеток серо-зеленого ивета.

При обработке ФИТЦ-иммуноглобулином КЧС тест-препаратов, приготовленных из проб органов и крови свиней, больных КЧС. обнаруживают ярко- теле нос свечение пигоплатмы клеток, часто расположенных группами.
ГОСТ 28573-90 С. 3

3. МЕТОД ВЫДЕЛЕНИЯ И ИДЕНТИФИКАЦИИ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ

Сущность метола заключается в инокуляции культуры лейкоцитов или костного мозга свиньи исследуемого материала н обнаружении реакции гемалсорбиии или вирусоспеиифического антигена в клетках прямой иммунофлуорес иен иней.

ЗЛ. Аппаратура, материалы и реАКТивы

Термостат, обеспечивающий температуру нагрева 37 *С.

Центрифуга лабораторная любого типа, обеспечивающая частоту вращения 5000 мин - '.

Шкаф сушильный.

Микроскол биологический.

Микроскоп люминесцентный.

Холодильник бытовой.

Мешалка магнитная.

Пипетки градуированные вместимостью I. 2. 5 и 10 см' по ГОСТ 29227. 11 робиркн бАКТериологические. Камера Горяева.

Стекла покровные по ГОСТ 6672. Стекла предметные по ГОСТ 9284.

Цилиндры мерные вместимостью 50 и 100 см' по ГОСГ 1770.

Банка цилиндрическая по ГОСТ 25336.

Ступка фарфоровая с пестиком.

Чашки Карреля.

Трубка силиконовая.

Иглы типа -Рекорд- IAI-16-90-1I5.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 18300.

Трепановый синий, раствор с массовой долей 0.5 %.

Монохлорамин Б технический по ГОСТ 14193, раствор с массовой долей 5 %. Гидролизат лАКТальбумина на растворе Эрла, раствор с массовой долей 0.1 % (ростовая среда): готовят в соответствии с УКАЗАНИЯми изготовителя. Пенициллин. Стрептомицин. Гепарин.

Раствор фосфатный буферный рН 7.2—7,4: готовят по п. 2.2.1.

Ацетон по ГОСТ 2603.

ФИТЦ-иммуноглобулины АЧС.

Вода дистиллированная.

3.2. Подготовка к aiia.iHiy

3.2.1. Приготовление культуры лейкоцитов крови

Культуру лейкоцитов готовят из крови здоровых поросят крупной белой породы живой массой 25—30 кг. Кровь берут в количестве 10—15 см1 из краниальной полой вены в стерильный цилиндр вместимостью 50—100 см-', содержащий гепарин 10—20 ЕД/см1, выдерживают 40—60 мин при температуре 37 'С и отделяют верхний слон, состоящий из плазмы и лейкоцитов. Плазму с лейкоцитами тщательно перемешивают и определяют концентрацию клеток.

Подсчет клеток проводят в камере Горяева. Для этого к пробе клеточной суспензии добавляют равный обьем раствора трепанового синего с массовой долей 0,5 %. Количество клеток определяют по всему полю камеры, имеющей 25 больших и 100 малых квадратов. Число кле

-=ОКОНЧАНИЕ ФРАГМЕНТА ДОКУМЕНТА=-

Документ ГОСТ 28573-90 можно получить тремя способами:

Приобрести полный комплект актуальных документов в виде электронного справочника на DVD. Мы предлагаем специализированные справочники для разных отраслей хозяйственной деятельности.

Так же, можно скачать ГОСТ 28573-90 или любой другой документ очень быстро и за смешные деньги, с оплатой любым способом (электронными деньгами, безналичным расчетом, отправкой SMS).

Если требуется официальное издание, то можно купить ГОСТ 28573-90 - печатную форму документа для технических библиотек и лицензирования деятельности предприятия.