МУК 4.2.3144-13 Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста

МУК 4.2.3144-13 Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста
ID 41743 *
МУК 4.2.3144-13 Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii в продуктах для питания детей раннего возраста - М., формат 60х84/8, 12 стр., вес 50 гр., 1+1, обл. 4+0 (цвет.)

Стандарт распространяется на природные пески с истинной плотностью зерен от 2,0 до 2,8 г/см куб. и смеси природных песков и песков из отсевов дробления, предназначенные для применения в качестве заполнителей тяжелых, легких, мелкозернистых, ячеистых и силикатных бетонов, строительных растворов, сухих строительных смесей, для устройства оснований и покрытий автомобильных дорог и оснований взлетно-посадочных полос и перронов аэродромов, обочин дорог, производства кровельных и керамических материалов, рекультивации, благоустройства и планировки территорий и других видов строительных работ. Стандарт не распространяются на пески из отсевов дробления плотных горных пород.

Содержание

1 Область применения
2 Нормативные ссылки
3 Термины и определения
4 Технические требования
5 Правила приемки
6 Методы испытаний
7 Транспортирование и хранение
Приложение А (обязательное) допустимое содержание вредных компонентов и примесей

Цена печатного издания:
260 руб. 221 руб.
Доставка РФ Самовывоз МСК
* подлинность печатного издания подтверждена голографическим элементом и печатью. Внешний вид издания может отличаться от представленного изображения без изменения потребительских свойств.
Доступность для заказа: В наличии
Дата начала действия: 26 ноя. 2013 г.
Дата окончания действия: 01 сен. 2017 г.
Количество страниц: 12 стр.
Статус документа: Взамен
Когда и где опубликован: Бюллетень нормативных актов федеральных органов исполнительной власти от 20 апреля 2009 г. N 16
Разработан:
  • НИИ питания РАМН
Утвержден:
  • 26 ноя. 2013 г. Главный Государственный санитарный врач России

Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод определения бактерий
Enterobacter sakazakii в продуктах
для питания детей раннего возраста

Дополнения и изменения к МУК 4.2.2428-08

Методические указания
МУК 4.2.3144-13

Москва 2014

1. Разработаны Федеральным государственным бюджетным учреждением «Научно-исследовательский институт питания» Российской Академии медицинских наук (В.А. Тутельян, С.А. Шевелева, И.Я. Конь, Н.Р. Ефимочкина, И.Б. Быкова, С.Ю. Батищева).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 29 октября 2013 г. № 3).

3. Утверждены врио Руководителя Федеральной службы по надзору в сфере зашиты прав потребителей и благополучия человека, Главного государственного санитарного врача Российской Федерации А.Ю. Поповой 26 ноября 2013 г.

4. Введены впервые.

УТВЕРЖДАЮ

Врио Руководителя Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главного государственного санитарного
врача Российской Федерации

А.Ю. Попова

26 ноября 2013 г.

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii
в продуктах для питания детей раннего возраста

Дополнения и изменения к МУК 4.2.2428-08

Методические указания
МУК 4.2.3144-13

1. По тексту документа изменить название Enterobacter sakazakii и записать в следующей редакции «Cronobacter spp. (Enterobacter sakazakii)» или «Cronobacter spp.».

2. Раздел 1 «Общие положения и область применения» дополнить п. 1.7 и изложить его в следующей редакции: «1.7. Методические указания носят рекомендательный характер».

3. Раздел 2 «Сущность метода» изложить в следующей редакции:

«2. Сущность метода

2.1. Метод определения бактерий Enterobacter sakazakii (Cronobacter spp.) основан на высеве определенных количеств продукта в жидкие неселективные среды для предварительного обогащения проб, пересеве в жидкие селективные среды для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae, с последующим пересевом на поверхность твердых селективных сред, инкубировании посевов, выявлении в этих посевах бактерий, способных расти и образовывать типичные колонии на поверхности селективного агара, с последующим выделением чистой культуры.

Ниже представлена методическая схема определения Cronobacter spp.

Таблица 1

Схема исследования сухих детских смесей на наличие Cronobacter spp.

Этап

Продолжительность инкубации, ч

Температура

1. Подготовка реактивов и материалов

2. Растворение навесок продукта в забуференной пептонной воде (ЗПВ) в соотношении 1:9 (при необходимости определения количества - навесок массой 100, 10 и 1 г в 3 колбы или пробирки с ЗПВ каждая), смешивание и инкубация

18 ± 2

37 °С

3. Посев 0,1 см3 проинкубированной суспензии в селективный питательный бульон для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae и инкубация

24 ± 2

44 °С

4. Пересев 0,1 мл проинкубированного бульона для выделения Enterobacteriaceae на поверхность хромогенного агара для выявления Cronobacter spp. (ESIA™) или фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG-agar)

24 ± 2

44 °С

5. Отбор 5 подозрительных на Cronobacter spp. колоний с поверхности хромогенного ESIA-aгapa, отбор всех типов колоний с поверхности фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG-agar); пересев на триптон-соевый агар с дрожжевым экстрактом (TSYEA) и инкубация

48 ± 2

25 °С

6. Отбор колоний с желтым пигментом, микроскопия по Граму и подтверждение их видовой принадлежности по биохимическим тестам идентификации

7. Интерпретация результатов.

При необходимости - подсчет наиболее вероятного числа (НВЧ) по количеству положительных проб в каждой из засеянных навесок продукта

2.2. Идентификация чистых культур проводится по совокупности морфологических, биохимических и других признаков, определяющих принадлежность к Е. sakazakii (Cronobacter spp.). Подтверждение принадлежности к Cronobacter spp. производится путем получения развернутых биохимических характеристик штаммов. Допускается использование тест-систем для биохимической дифференциации энтеробактерий API 20Е, Rapid 20E, ID 32Е (ф. «БиоМерье», Франция) и др.

Определение биохимических характеристик, подтверждающих принадлежность выделенных штаммов к роду Cronobacter spp. и дифференцирующих их от близкородственных представителей энтеробактерий Enterobacter cloacae и Pantoea agglomerans, приведены в табл. 2.

Таблица 2

Биохимическая дифференциация Cronobacter spp.

Тест или субстрат

Реакции

E. sakazakii (Cronobacter spp.)

E.cloacae

Р. agglomerans

Желтый пигмент при 25 °С

+

-

(+)

D-сорбит

-

+

(+)

α-глюкозидаза

+

(-)

-

Разжижение желатины (22 °С)

-

-

+

Оксидаза

-

-

-

Лизиндекарбоксилаза

-

-

-

Аргининдигидролаза

+

+

-

Орнитиндекарбоксилаза

+

+

(-)

Утилизация цитратов

+

+

+

Реакция Фогес-Проскауэра

+

+

(+)

Индол

-

-

(-)

Глюкоза

+

+

+

Маннит

+

+

+

Лактоза

+

+

(+)

Сахароза

+

+

(+)

L-рамноза

+

+

(+)

D-мелибиоза

+

+

Амигдалин

+

-

(-)

Подвижность

+

+

(+)

Мукоидный рост

+

+

+

Примечания:

«+» - 90 - 100 % штаммов положительные; «(+)» - 21 - 89 % штаммов положительные;

«-» - 0 - 9 % штаммов положительные; «(-)» - 10 - 24 % штаммов положительные

Ведущими дифференцирующими признаками Cronobacter spp. являются:

• способность к образованию желтого пигмента при культивировании на неселективных средах при температуре 25 °С;

наличие α-глюкозидазной активности на хромогенных средах, содержащих 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-α-D-глюкопиранозид;

• отсутствие способности к ферментации D-сорбита.

Для дифференциации Cronobacter spp. от сорбитвариабельных и обладающих желтым пигментом представителей рода Pantoea agglomerans (Syn: Envinia spp.) используется тест разжижения желатины.».

4. В разделе 3.3 «Реактивы и питательные среды» перечень питательных сред дополнить следующими наименованиями:

• модифицированный лаурилсульфат триптозный бульон с ванкомицином (мЛСТ с ванкомицином);

Enterobacter sakazakii хромогенный агар (ESIA™) или селективные хромогенные среды аналогичного назначения, соответствующие требованиями стандарта ISO/TS 22964:2006 IDF/RM 210:2006.

5. Раздел 4.2 «Приготовление питательных сред» дополнить пп. 4.2.6, 4.2.7 и 4.2.8 в следующей редакции:

«4.2.6. Забуференная пептонная вода

Состав среды

Концентрация, г/дм3

Хлорид натрия (NaCl)

5,0

Ферментативный гидролизат казеина

10,0

Двузамещенный фосфат натрия 12-водный (Na2HPO4 × 12Н2O)

9,0

Однозамещенный фосфат калия (KН2РO4)

1,5

Компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают pH 7,0 ± 0,2 при 25 °С, и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

4.2.7. Модифицированный лаурилсульфат триптозный бульон (мЛСТ) с ванкомицином

Состав среды

Концентрация, г/дм3

Хлорид натрия (NaCl)

34,0

Пептон ферментативный

20,0

Лактоза

5,0

Однозамещенный фосфат калия (KH2РO4)

2,75

Двузамещенный фосфат калия (K2НРO4)

2,75

Лаурилсульфат натрия (C12H25NaO5S)

0,1

Компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают pH 6,8 ± 0,2 при 25 °С, разливают по 10 мл в пробирки и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин.

Приготовление рабочего раствора ванкомицина: 10 мг ванкомицина растворяют в 10 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают и стерилизуют методом мембранной фильтрации. Готовый раствор ванкомицина может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 15 суток.

Для получения готовой среды раствор ванкомицина вносят в каждую пробирку со стерильной основой мЛСТ в количестве 0,1 см3 для получения конечной концентрации ванкомицина в готовой среде 10 мкг/см3. Готовая среда может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 1 суток.

4.2.8. Enterobacter sakazakii хромогенный агар (ESIA™)

Состав среды

Концентрация, г/дм3

Панкреатический гидролизат казеина (триптон)

7,0

Дрожжевой экстракт

3,0

Хлорид натрия (NaCl)

5,0

Деоксихолат натрия

0,6

5-бромо-4-хлоро-3-индолил-α-D-глюкопиранозид (C14H15BrClNO6)

0,15

Кристаллический фиолетовый

2 мг

Агар-агар

12,0 - 18,0*

_____________

* В зависимости от способности агара к гелеобразованию

Компоненты растворяют в 1000 см3 дистиллированной воды, тщательно перемешивают, устанавливают pH 7,0 ± 0,2 при 25 °С, и автоклавируют при 121 °С в течение 15 мин. Стерилизованную агаровую среду охлаждают до температуры 44 - 47 °С и разливают по 15 см3 в стерильные чашки Петри.

Готовая среда может храниться при температуре от 0 до 5 °С в течение 1 суток.».

5. Раздел 6. «Проведение анализа» изложить в следующей редакции:

«6. Проведение анализа

6.1. Пробы продуктов массой 100 г, 125 г или 137,5 г вносят в забуференную пептонную воду (ЗПВ) по п. 4.2.6 в соотношении 1:9 по объему. Посевы термостатируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (18 ± 2) ч.

6.2. При количественном анализе общая масса (объем) навески должна быть не менее 400 г (см3).

Из подготовленной по п. 5 пробы отбирают 4 навески (порции) продукта массой 100 г (см3) каждая для анализа. Производят посев каждой из трех навесок (порций) в 900 см3 ЗПВ и перемешивают.

Из четвертой навески (порции) массой (объемом) 100 г (см3) отбирают три навески (порции) продукта массой 10 г (см3) и производят посев в 90 см3 ЗПВ и перемешивают. Из этой же пробы отбирают три навески (порции) продукта массой 1 г (см3) и производят посев в 9 см3 ЗПВ. Для посева (при необходимости - предполагаемом высоком содержании Cronobacter spp. в продукте) меньших количеств продукта - 0,1 и 0,01 г, делают десятикратно убывающие разведения навески массой 10 г, и вносят по 1 см3 (х 3) соответствующих разведений в 9 см3 ЗПВ.

Посевы термостатируют при температуре (37 ± 1) °С в течение (22 ± 2) ч.

6.3. После термостатирования проб продукта в среде для первичного накопления 0,1 см3 суспензии пересевают в 10 см3 модифицированного лаурилсульфат триптозного бульона с ванкомицином (арбитражная среда) или в 10 см3 одной из жидких селективных сред для выделения бактерий семейства Enterobacteriaceae по ГОСТ 29184-91 - среду Кесслер с глюкозой, или буферный глюкозный бульон с бриллиантовым зеленым и желчью, или бульон Мак-Конки. Посевы термостатируют при температуре 44 °С в течение (24 ± 2) ч.

6.4. Из посевов после термостатирования, независимо от наличия или отсутствия признаков роста, делают пересев штрихом на поверхность хромогенного агара по п. 4.2.8 для выявления Cronobacter spp., содержащего 5-бромо-4-хлоро-3-индолил-α-D-глюкопиранозид (арбитражная среда), или на поверхность фиолетово-красного желчного агара с глюкозой (VRBG-aгap). Чашки с агаризованной средой предварительно подсушивают. Посевы термостатируют при температуре 44 °С в течение (24 ± 2) ч.

6.5. При отсутствии роста на поверхности хромогенного агара для выявления Cronobacter spp. или VRBG-aгapa анализ прекращают и дают заключение об отсутствии Cronobacter spp. в исследованной пробе.

6.6. После этапа селективного обогащения проб для обнаружения Cronobacter spp. (п. 6.3), допускается использовать ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в соответствии с процедурой, изложенной в МУК 4.2.2872-11. При получении отрицательных результатов исследований образцов предварительно обогащенных жидких селективных сред с применением ПЦР анализ прекращают и дают заключение об отсутствии Cronobacter spp. в исследованной пробе.

6.7. При обнаружении на чашках хромогенного агара для выявления Cronobacter spp. роста подозрительных культур для дальнейшего изучения отбирают 3-5 характерных колоний. При обнаружении на поверхности VRBG-aгapa роста дальнейшему изучению подвергают все обнаруженные варианты культур, для чего отбирают по 3 - 5 колоний каждого типа.

6.8. Отобранные для исследования 3 - 5 характерных колоний пересевают на поверхность триптон-соевого агара с дрожжевым экстрактом и термостатируют при температуре 25 °С в течение (48 ± 2) ч. В качестве положительного контроля используют референс-штамм Е. sakazakii (Cronobacter spp.), типичный по фенотипическим свойствам.

6.9. Культуры, растущие на триптон-соевом агаре с образованием желтого или желто-коричневого пигмента, подвергают дальнейшему изучению для подтверждения принадлежности к Cronobacter spp.».

6. Раздел 10. «Нормативные ссылки» изложить в следующей редакции:

10.1. ГОСТ Р 54005-2010 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения количества бактерий семейства Enterobacteriaceae».

10.2. ГОСТ ISO 7218-2011 «Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям».

10.3. ГОСТ Р 54004-2010 «Продукты пищевые. Методы отбора проб для микробиологических испытаний».

10.4. ГОСТ 26669-85 «Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов».

10.5. ГОСТ 26670-91 «Продукты пищевые. Методы культивирования микроорганизмов».

10.6. ГОСТ 10444.1-84 «Консервы. Приготовление растворов, красок, индикаторов, питательных сред, применяемых в микробиологическом анализе».

10.7. ГОСТ 26809-86 «Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу».

10.8. ГОСТ Р ИСО 707-2010 «Молоко и молочные продукты. Руководство по отбору проб».

10.9. СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III - IV групп патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней».

10.10. МУК 4.2.577-96 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

10.11. Стандарт ISO/TS 22964:2006 IDF/RM 210:2006 «Milk and milk products - Detection of Enterobacter sakazakii».

10.12. МУК 4.2.2872-11 «Методы выявления и идентификации патогенных бактерий - возбудителей инфекционных заболеваний с пищевым путем передачи в продуктах питания на основе ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией».

10.13. Технический Регламент Таможенного союза ТР ТС 021/2011 «О безопасности пищевой продукции».

Страница 1 из 12
Страница 2 из 12
Страница 3 из 12
Страница 4 из 12
Страница 5 из 12
Страница 6 из 12
Страница 7 из 12
Страница 8 из 12
Страница 9 из 12
Страница 10 из 12
Страница 11 из 12
Страница 12 из 12
Поиск ГОСТов и технической литературы
Нет времени искать? Запрос цен и КП (отвечаем оперативно)