Главная » Каталог документов » ГОСТ 20909.6-75

ГОСТ 20909.6-75
"Сперма быков неразбавленная. Методы биохимических исследований"

- 247,00 руб.;
- Официальное издание;
- Доставка или cамовывоз.
- от 95,00 руб./день;
- Мгновенное подключение;
- Различные формы оплаты.
- от 8 790,00 руб.;
- Тысячи (!) документов на DVD;
- Ежеквартальное обновление.

Статус документа: действующий

Дата вступления в действие: 1976-07-01


Документ относится к следующим разделам классификатора:

Нормативно-технические документы. Национальные стандарты
Здравоохранение
Ветеринария *Включая специальное ветеринарное оборудование


Содержание для ознакомления



ВНИМАНИЕ!!
ФРАГМЕНТ ТЕКСТА ДОКУМЕНТА ПРЕДСТАВЛЕН ИСКЛЮЧИТЕЛЬНО ДЛЯ ОЗНАКОМЛЕНИЯ И СОДЕРЖИТ ОШИБКИ
ОРИГИНАЛ ДОКУМЕНТА СООТВЕТСТВУЕТ ОФИЦИАЛЬНОМУ ИЗДАНИЮ

УДК ei»:61l-013.1l:S77.1IMJJ*| Гртвяв РЗ»

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ СОЮЗА ССР

СПЕРМА БЫКОВ НЕРАЗБАВЛЕННАЯ

МвТОДЫ DMOIMMHUCEHHI НССПВДОВВНИЙ I I

Non-diluted spcrii ol buds. 20909 6 74

Methods of biochemical tests t «i

Постайо«пенм«м Государстве-иивго коныец стандартов Совета Мин.строе СССР от if сентября. 197S г. Ht 2440 срок действия уствновввн

С От-07.7а до oi.wn

Несоблюдение стандарта преследуется по вакоиу

Настоящий стандарт распространяется на неразбавленную све-жеполученную сперму быков н устанавливает метопы биохимических исследований с целью определен)!я содержания аденознн-фосфатов а сиермних и микроэлементов н кетоновых тел в спорые.

U МЕТОД ОТБОРА ПРОБ

1.1. Отбор проб ~ по ГОСТ 20909.1—75.

1.2. Для проведения испытании применяют свежеполученчу» сперму, хранившуюся при температуре 30—35СС не более 30 мин.

2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АДЕНОЗННФОСФАТОВ В СЛЕРМИЯХ

Сущпость метода заключается в определении содержания лабильного фосфора, освобожденного прн гидролизе аденозинтри-фосфорноЯ и адсиозиндифосфорной кислот, предварительно адсорбированных на АКТивированном угле.

2.1. Обор удов а н не и реАКТивы

2.1.1. Для проведения испытания применяют:

ненгрнфугу;

шкаф сушильный лабораторный но ГОСТ 7365—55; фотоэлектроколориметр; Сапю водяную; пробирки центрифужные;

Перепечатка воспрещен*

35
Cip. 2 ГОСТ 1WW.4— 71

холодильнички;

воронки стеклянные но ГОСТ 8613—64;

пипетки стеклянные градуированные вместимостью 2 и 5 мл по ГОСТ 12487—67;

уголь АКТивированный марки БАУ по ГОСТ 6217—74; фильтры бумажные по ГОСТ 12026—66; кислоту трихлоруксусную, х. ч.;

спирт этиловый ректификованный по ТОСУ ^962—67; кислоту соляную по ГОСТ 3118—67, х.ч.; кислоту серную по ГОСТ 4204—66. х. ч.; аммоний молибденовокислый но ГОСТ 3765—72. х.ч.; кислоту аскорбиновую по ГОСТ 4815—54. х.ч.-. калий фосфорнокислый однозаыетценный по ГОСТ 4198—75, х.ч.;

воду дистиллированную по ГОСТ 6709—72. 2.2. Подготовка к испытанию 2.2.1. Подготовка АКТивированного угля

К 100 г тщательно растертого угля добавляют 500 мл 3 и. соляной кислоты. Смесь кипятят в течение 60 мин. затем кислоту удаляют фильтрованием. Уголь заливают I л дистиллированной воды, кипятят в течение 60 мин,* фильтруют через фильтровальную бумагу. Эту операцию повторяют три раза. Промытый уголь высушивают при температуре 140 С. Затем еще раз проводят трехкратное кипячение АКТивированпого угля с 1 л дистиллированной воды в течение 40 мни с последующим фильтрованием. Уголь на фильтре промывают горячей дистиллированной водой до получения фильтрата с рН 4. затем уголь высушивают прн температуре 140"С.

2.25. Построение градуировочного ГРАФИКа

Иэ 'перекрнсталлнзонанного одноз а чещенного фосфата калия готовят основной раствор фосфора.

Перекристаллизацию фосфата калия ведут, охлаждая при 2— 5°С профильтрованный через двойной бумажный фнльтр горячий насыщенный раствор фосфата калия, который приготавливают на бндистиллированной воде. Выпавшие кристаллы высушивают в течение трех-четырех дней при температуре 36—ЗГС до постоянной массы. Растворяют 0,4394 г пере кристаллизованного фосфата калия в мерной колбе вместимостью 1 л и доливают дистиллированной водой до метки. Приготовленный раствор перемешивают. I мл основного раствора содержит 0,1 мг фосфора.

Для построения градунровочиого ГРАФИКа нз основного раствора фосфора готовят ряд разведений. Для этого в мерные колбы вместимостью 100 мл помещают соответственно 1, 2, 3. 4, 5 мл основного раствора. Колбы доливают бндистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. В 1 мл каждого из приготовленных растворов будет содержаться соответственно 2, 3, 4, 5 мкг

36
ГОСТ 2ww.6—7i Стр. Э

фосфора. Из каждой колбы в пробирки берут 1 мл раствора фосфата калия, добавляют I мл 2,5%-ного молибдата в 5 и. растворе серной кислоты и 1 мл 0,5%-ного свежеприготовленного раствора аскорбиновой кислоты. Объем раствора в пробирках доводят бн-днстнллированной водой до 10 мл. Пробирки ставят на водяную баню при ЗГС на 10 мнн и затем охлаждают. Оптическую плотность растворов измеряют на фотоэлектроколориметре при красном светофильтре в кюветах с рабочей длиной, против бидистил-лнрованной воды 10 мм.

По полученным значениям оптической плотности растворов строят градунровочный ГРАФИК. Для этого по оси абсцисс откладывают численные значения концентрации фосфора, а но оси ординат -- соответствующую оптическую плотность раствора. Точки пересечения восстановленных перпендикуляров соединяют лилией.

Градунровочный ГРАФИК строят для каждого фотоэлектроколориметра и проверяют его ежемесячно.

2.2.3. Определение концентрации спермисв в сперме - - по ГОСТ 20909.5—75.

2.3. Проведение испытания

2.3.1. К пробе спермы (независимо от ее объема) с содержанием ие менее 400 млн спермиев добавляют равный объем 20%-ноЙ трнхлоруксусной кислоты.

Пробы ставят на I ч в холодильник при температуре 2—3*С. помешивая через каждые 10—15 мни. По истечении УКАЗанного срока к исследуемому материалу добавляют равный объем -дистиллированной воды (концентрацию трнхлоруксусной кислоты доводят таким образом до 5%), тщательно размешивают стеклянной палочкой и центрифугируют в течение 7—10 мнн при частоте вращения 3—4 тыс. об/мин.

Центрифугат сливают в центрифужные пробирки или в чистые флаконы вместимостью 10—15 мл. в которые предварительно помещают по 250 мг специально подготовленного АКТивированного угля. Параллельно с опытными пробами ставят контрольные: в две пробирки, содержащие по 250 мг угля, вместо цепгрнфугата вносят по 4 мл 5%-ноЙ трнхлоруксусной кислоты.

Пробирки с цевтрнфугатом и углем, а также контрольные пробирки ставят в холодильник на 20 ынн, перемешивая их содержимое ие менее двух раз. Для лучшего оседания угля к смеси добавляют 0,2—0.3 мл этилового спирта. Смесь центрифугируют в течение 10—15 мин при частоте вращения 3—4 тыс. об/мяв.

Центрифугат сливают и уголь дважды промывают. В начале добавляют 5 мл дистиллированной воды н 0,2—0.3 мл спирта. Смесь центрифугируют прн частоте вращения 2—3 тыс. об/мин в течение 3—6 мин и центрифугат сливают. Вторично осадок про-
Cip. 4 ГОСТ 109СЧ 6 75

МЫКОЮТ без добавления спирта (осадок каждый раз номсшиваюг стекляннан палочкой).

К промытому осадку добавляют 0.5 мл 2 и. раствора соляной кислоты н 2 мл I н. раствора соляной кислоты. Смесь гндролизу-Ю1 10 мин на кипящей водяной бане о пробирках, закрытых холодильничками Пробирки с раствором охлаждают до 18—20"С добзнлнют 2 мл дистиллированной воды, перемешивают н центри -фугируют 5—7 мин прн частоте вращения 3—4 тыс. обмин. Цент-риф\гат отфильтровывают через бумажный фнльтр.

Фильтрат в количестве 2 мл переносят в чистые пробирки нли флаконы, добавляют 1 мл 2,5%-вого раствора чолибденовокнсло-го аммония, приготовленного на 5 н. серной кислоте и I мл 0,5%-ного раствора свежеприготовленной аскорбиновой кислоты. Раствор доливают до 10 мл дистиллированной водой, ставят па водяную баню при ЗГС на 10 мин и затем охлаждают. Охлажденный раствор колориметр вру ют на фотоэлектроколорн метре при красном светофильтре против контрольных растворов в кюветах с рабочей длиной 10 мы.

2.4. Обработка результатов

2.4.1. Оптическую плотность Ф-.) в пересчете на I млрд спер-мнев вычисляют по формуле

где D — оптическая плотность исследуемого раствора; с — концентрация спермиев в сперме, млрд-мл. 25 — коэффициент пересчета.

Содержание фосфора аденозинтрнфосфорной н аденозинднфос-форной кислот я I млрд спермиев в микрограммах определяют по градуировочному ГРАФИКу, находя значение фосфора по соответствующей величине оптической плотности.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Допускаемые расхождения между результатами параллельных определений не должны превышать ±10%.

1 ОПИД1ШММ€ С О ДI РЖАНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ В СПСРМС

Содержание микроэлементов в сперме определяют химическим нли спектральным методом.

3.1. Химический мето

-=ОКОНЧАНИЕ ФРАГМЕНТА ДОКУМЕНТА=-

Документ ГОСТ 20909.6-75 можно получить тремя способами:

Приобрести полный комплект актуальных документов в виде электронного справочника на DVD. Мы предлагаем специализированные справочники для разных отраслей хозяйственной деятельности.

Так же, можно скачать ГОСТ 20909.6-75 или любой другой документ очень быстро и за смешные деньги, с оплатой любым способом (электронными деньгами, безналичным расчетом, отправкой SMS).

Если требуется официальное издание, то можно купить ГОСТ 20909.6-75 - печатную форму документа для технических библиотек и лицензирования деятельности предприятия.